1.分段沉淀法：(适合于皂苷的分离)

　　①原理：利用皂苷难溶于乙醚、丙酮等溶剂。

　　②操作：将粗皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中，然后逐滴加入乙醚、丙酮或乙醚-丙酮(1：1)的混合溶剂(加入量以能使皂苷从醇溶液中析出为限)，边加边摇匀，皂苷即可析出。

　　③分段沉淀法，逐渐降低溶剂极性，极性不同的皂苷就可分批沉出，从而达到分离的目的。分段沉淀法虽然简便，但难以分离完全。

　　2.胆甾醇沉淀法

　　①原理：皂苷可与胆甾醇生成难溶性的分子复合物(三萜皂苷与胆甾醇形成的复合物不如甾体皂苷与胆甾醇形成的复合物稳定)。

　　②操作：先将粗皂苷溶于少量乙醇中，再加入胆甾醇的饱和乙醇溶液，至不再析出沉淀为止(混合后需稍加热)，滤过，取沉淀用水、醇、乙醚依次洗涤以除去糖类、色素、油脂和游离的胆甾醇，然后将此沉淀干燥后，用乙醚回流提取，胆甾醇被乙醚提出，使皂苷解脱下来，残留物即为较纯的皂苷。但是，此法已经基本不被应用。

　　3.色谱分离法

　　色谱法是目前分离三萜类化合物最常用的方法，通常采用多种色谱法相组合的方法。

　　①吸附柱色谱法;②分配柱色谱法;③高效液相色谱法;④大孔树脂柱色谱;⑤凝胶色谱法。

　　(1)吸附柱色谱法：

　　①常用方法，可用于分离各类三萜化合物。

　　②依据所用的吸附剂性质的不同，分为正相吸附柱色谱和反相吸附柱色谱。

　　③正相吸附柱色谱的吸附剂常用硅胶。

　　④反相柱色谱通常以键合相硅胶Rp-18、Rp-8或Rp-2等为填充剂。

　　(2)分配柱色谱法：多用于分离皂苷，常用硅胶等作为支持剂，固定相为3%草酸水溶液等，流动相为含水的混合有机溶剂：如氯仿-甲醇-水，正丁醇-水等。

　　(3)高效液相色谱法：是目前分离皂苷类化合物最常用的方法，分离效能较高。用于皂苷的分离制备一般采用反相色谱柱，以甲醇-水、乙腈-水等系统为洗脱剂。

　　(4)大孔树脂柱色谱：适用于皂苷的精制和初步分离。

　　操作：将含有皂苷的水溶液通过大孔树脂柱后，先用水洗涤除去糖和其他水溶性杂质，然后再用浓度由低到高的甲醇或乙醇依次进行梯度洗脱，极性大的皂苷可被l0%～30%的醇洗脱下来，极性小的皂苷则被50%以上的醇洗脱下来。

　　(5)凝胶色谱法：分子筛的原理来分离分子量不同的化合物，在用不同浓度的甲醇、乙醇或水等溶剂洗脱时，各成分按分子量递减顺序依次被洗脱下来。即分子量大的皂苷先被洗脱下来，分子量小的皂苷后被洗脱下来。应用较多的是在有机相中使用的Sephadex LH-20.